Desarrollo, validación e implementación de un kit para la identificación de especies del género Naupactus, mediante herramientas moleculares (PCR en tiempo real), para la reducción de rechazos en la industria citrícola exportadora chilena

Objetivo general

Desarrollar, validar e implementar un Kit de identificación rápida del género Naupactus mediante herramientas moleculares (PCR en tiempo real) que puedan ser utilizadas en la inspección de cítricos, con el fin de disminuir pérdidas causadas por rechazos atribuibles a dicha especie

Objetivos específicos

1. Desarrollo de un kit de identificación de especies del género Naupactus para implementar la técnica de análisis mediante PCR en tiempo real en el proceso de exportación de cítricos.2. Validación de la técnica con USDA para su aceptación oficial, mediante la ejecución de un estudio paralelo entre identificación taxonómica e identificación por PCR en tiempo real.3. Difusión y transferencia incluyendo la instalación en el SAG de un sitio de inspección piloto y capacitación de su personal para utilizar la herramienta tecnológica desarrollada.

Resultados

La superficie total plantada con cítricos en Chile es de aproximadamente 18,8 mil ha. Lasprincipales especies producidas son el naranjo (7,8 mil ha), limonero (7,1 ha) y mandarino(3,6 mil ha) (ODEPA, 2013).La temporada 2013, Chile exportó un valor cercano a las 169.500 toneladas de cítricos, conretornos por U$185 millones FOB.Actualmente, el principal destino de los cítricos de exportación es Estados Unidos,representando un 78,5% del total de los cítricos exportados.El problema que se aborda en este proyecto tiene relación con la alta tasa de rechazo de loscítricos de exportación debido a la presencia de huevos de curculionidos, asociadosinmediatamente a la especie Naupactus xanthographus, cuerentenaria para EEUU.La tasa de rechazo de los cítricos ha sido variable en las cinco últimas temporadas, con unpromedio de 5% y un máximo de 7% del total de cajas exportadas (Comité de cítricos).Las principales causas de rechazo USDA (EE.UU) se deben a la presencia de plagascuarentenarias entre las que destacan los curculiónidos (71% de las cajas rechazadas),pseudocóccidos (17% de las cajas rechazadas) y Brevipalpus chilensis (8% de las cajasrechazadas) (Comité de Cítricos).Como se mencionó, la especie Naupactus xanthographus es cuarentenaria, sin embargoNaupactus cervinus no lo es. La dificultad radica en que no existe una herramienta quepermita la identificación de los huevos de estos dos curculiónidos, por lo que la sola sospechade la presencia de huevos de N. xanthographus es causal del rechazo total del envío encuestión.Esto es relevante al considerar que según Rippa (2008) los hábitos de ovipostura para estasespecies de Naupactus son diferentes, observando que N. cervinus ovipone bajo los sépalosde naranjas mientras que N. xanthographus no lo hace, por lo que la detección de huevos enfrutos podría corresponder a N. cervinus, lo que no justifica el rechazo.Ante este panorama, por encargo del Comité de Citricos, investigadores del INIAdesarrollaron un sistema de diagnostico molecular basado en PCR (convencional), estemétodo permitiría identificar los huevos de los distintos géneros de Naupactus, a través de laidentificación de fragmentos de la secuencia genética de cada uno de ellos.En este proyecto se pretende incorporar la secuenciación y técnica de PCR convencionalpara Naupactus, en el desarrollo de un Kit PCR en tiempo real (PCR-RT), mucho más rápido,seguro y certero que el convencional y que además tiene la ventaja de ser aplicado durante lainspección en origen realizada por el SAG, en un tiempo aproximado de dos horas.El objetivo de la propuesta es Desarrollar, validar e implementar un Kit de identificaciónrápida del género Naupactus mediante herramientas moleculares (PCR en tiempo real) quepuedan ser utilizadas en la inspección de cítricos, con el fin de disminuir pérdidas causadaspor rechazos atribuibles a dicha especie.Para alcanzar el objetivo propuesto la ASOEX en asociación con el SAG, coordinarán tantolas actividades necesarias para la obtención del Kit PCR-RT, como su validación ante elUSDA, aspecto fundamental para la aplicación de esta herramienta tecnológica.Como resultados del proyecto, además de las actividades mencionadas: obtención yvalidación del kit, se ha considerado la instalación de un sitio piloto para la su uso y aplicaciónen las dependencias del SAG, de manera tal que quede asegurado su transferencia al sectorproductivo.